Proteinaasi K -jauhe CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. on yksi kokeneimmista proteinaasi k -jauheen cas 39450-01-6 valmistajista ja toimittajista Kiinassa. Tervetuloa tukkumyyntiin korkealaatuiseen proteinaasi k -jauheeseen cas 39450-01-6 myyntiin täällä tehtaaltamme. Hyvä palvelu ja kohtuullinen hinta on saatavilla.

Proteinaasi K -jauheon erittäin tehokas, ei--spesifinen seriiniproteaasi, jota käytetään laajalti molekyylibiologiassa ja biokemiassa pääasiassa proteiinien hajottamiseen ja saastuttavien proteiinien poistamiseen nukleiinihappovalmisteista. Se on peräisin sienestä Engyodontium album (entinen Tritirachium album), ja se säilyttää aktiivisuutensa laajalla lämpötila-alueella (20-60 astetta) ja pH:ssa (4-12), vaikka sitä inkuboidaan liuoksessa, joka sisältää SDS:ää (0,5-1 %) tai ureaa (4 M) denaturoivissa olosuhteissa.

Entsyymi hajottaa tehokkaasti monenlaisia ​​proteiineja, mukaan lukien RNaasi ja DNaasi, katkaisemalla peptidisidoksia (ensisijaisesti hydrolysoimalla alifaattisten/aromaattisten aminohappojen karboksyylipäätä), ja siksi sitä käytetään nukleaasien poistamiseen DNA/RNA-uutossa nukleiinihappojen eheyden varmistamiseksi. Lisäksi sitä käytetään yleisesti kudosten pilkkomisessa (esim. parafiini-upotetut näytteet), solujen hajoamisessa ja proteomiikkatutkimuksissa.

Proteinaasi K -jauhe toimitetaan yleensä lyofilisoidussa muodossa, joka on erittäin stabiili (-20 astetta pitkäaikaiseen varastointiin) ja se on liuotettava puskuriin (esim. Tris-HCl, EDTA) ennen käyttöä. Sen aktiivisuus riippuu Ca2+:sta, mutta kelatointiaineet, kuten EDTA, estävät vain osittain entsyymiaktiivisuutta. Itsehajoamista on vältettävä käsittelyn aikana ja suositellaan lämpöinaktivointia 65 asteessa. Sen tehokkaan proteiinihydrolysoimiskyvyn vuoksi tarvitaan huolellista suojaa iho- tai limakalvokosketuksen välttämiseksi.

Proteinaasi k -jauhe, joka tunnetaan myös nimellä Proteinase K tai EC 3.4.21.14, on seriiniproteaasi, joka on eristetty ja puhdistettu Tritirachium album Limberistä. Sen ensimmäisestä eristämisestä lähtien Wolfgang Ebeling et al. vuonna 1974 proteinaasi K:ta on käytetty laajalti biokemiassa, molekyylibiologiassa, lääketieteessä ja teollisuudessa sen korkean aktiivisuuden ja laajan substraattispesifisyyden vuoksi.

DNA:n ja RNA:n uuttamisprosessissa proteinaasi K:n päätehtävä on hajottaa nukleiinihappoihin sitoutuneita proteiineja, jolloin DNA tai RNA voi olla vapaana liuoksessa myöhempää uuttamista ja puhdistusta varten. Koska proteinaasi K on stabiili ja korkea denaturointiaineissa, kuten ureassa ja SDS:ssä, sitä käytetään yleisesti plasmidien tai genomisen DNA:n ja RNA:n eristämiseen.

proteinaasi K voi estää RNAasin toimintaa ja suojata RNA:ta hajoamiselta.

1. DNA- ja RNA-uutto

 

DNA:n uuttaminen: Proteaasi K voi hydrolysoida DNA:han sitoutuvia histoneita, jolloin DNA voi dissosioitua liuoksessa. Sen jälkeen epäpuhtaudet poistettiin erilaisilla menetelmillä, kuten fenolikloroformiuutolla, etanolisaostuksella jne., ja puhdistettu DNA kerättiin.
RNA:n uuttaminen: RNA-uuttoprosessin aikana RNA-entsyymejä on yleisesti läsnä ympäristössä, ja näytejärjestelmä itsessään voi myös sisältää RNA-entsyymejä, mikä tekee RNA:sta erittäin herkkiä hajoamiselle. Lisäämällä pieni määrä

2. In situ -hybridisaatiotekniikka

 

In situ -hybridisaatioteknologiaa käytetään yleisesti proteinaasi K:tä esihybridisaatioprosessoinnissa kohde-DNA:ta ympäröivien proteiinien pilkkomiseksi, koettimen sitoutumismahdollisuuden lisäämiseksi kohdenukleiinihappoon ja hybridisaatiosignaalin tehostamiseksi. On kuitenkin huomioitava, että kun proteinaasi K:n pitoisuus on liian korkea, pilkkoutumisaika on liian pitkä tai inkubaatiolämpötila on liian korkea, se voi vahingoittaa solurakennetta, mikä johtaa kudososien irtoamiseen ja soluytimien katoamiseen, mikä vaikuttaa hybridisaatiotuloksiin. Siksi käytännön sovelluksissa on välttämätöntä valvoa tiukasti proteinaasi K:n pitoisuutta ja käsittelyaikaa.

3. Viruksen inaktivointi ja desinfiointi

 

Proteaasi K:ta voidaan käyttää vahvan proteolyyttisen aktiivisuutensa ansiosta viruksen inaktivointiin ja desinfiointiin. Tutkimukset ovat osoittaneet, että puhtaan veden ja kotitalousjäteveden käsitteleminen tietyllä proteinaasi K-pitoisuudella voi tehokkaasti inaktivoida viruksia. Proteaasi K voi viruksia inaktivoivana desinfiointiaineena vähentää tavanomaisten oksidatiivisten kemiallisten desinfiointiaineiden mahdollisia haittoja ihmiskeholle, ja sen tuotanto ja kuljetus ovat turvallisia ilman peruuttamatonta ympäristön saastumista.

4. Western blot -menetelmä ja pulssielektroforeesi

 

Proteaasi K:ta on myös käytetty laajasti kromosomi-DNA:n valmistuksessa pulssielektroforeesia, Western blotting -testiä ja muita kokeita varten. Western blot -kokeissa proteinaasi K:tä voidaan käyttää poistamaan ei--spesifisiä proteiineja näytteestä, mikä parantaa blotin spesifisyyttä ja herkkyyttä. Pulssielektroforeesikokeissa proteinaasi K voi hajottaa DNA-näytteiden proteiiniepäpuhtauksia ja parantaa elektroforeesin tehokkuutta.

5. Proteiinin havaitseminen ja tunnistaminen

 

Proteinaasi k -jauhevoidaan käyttää myös tiettyjen proteiinien havaitsemiseen ja tunnistamiseen. Esimerkiksi tarttuvan spongiformisen enkefalopatian (TSE) tutkimuksessa proteinaasi K:tä voidaan käyttää aivokudosnäytteissä olevien proteiinien pilkkomiseen ja prioniproteiinien läsnäolon tunnistamiseen tunnistamalla patogeenisten prionien vastustuskyky proteinaasi K:lle. Lisäksi proteinaasi K:tä voidaan käyttää myös kokeisiin, kuten entsyymien lokalisoimisen määrittämiseen solukalvoilla (endotoksiineihin sitoutuneina proteiineja siirtävinä kationeina). lysotsyymi ja ribonukleaasi A).

1. Lääketieteellinen ala

 

Kliininen käyttö: Proteaasi K:llä on tietty lääketieteellinen arvo. Esimerkiksi ruoansulatushäiriöiden hoitaminen mahan proteaasilla, keuhkoputkentulehduksen hoito happamalla proteaasilla, vaskuliitin hoito elastaasilla jne. Lisäksi trypsiiniä, kymotrypsiiniä jne. käytetään yleisesti myös kirurgisten märkivien haavojen puhdistukseen ja keuhkopussin seroosin tarttumien hoitoon.
Virusten havaitseminen ja diagnoosi: Proteaasi K:llä on myös mahdollisia sovelluksia virusten havaitsemiseen ja diagnosointiin. Pilkomalla virusnäytteen proteiinit ja paljastamalla viruksen nukleiinihapon se tarjoaa mukavuuden myöhempään nukleiinihappotestaukseen.

2. Teollisuussektori

 

Nahkateollisuus: Protease K:ta käytetään nahkateollisuudessa karvojen poistoon ja pehmentämiseen, mikä voi säästää aikaa ja parantaa työhygieniaa.
Tekstiiliteollisuus: Proteaasi K:ta voidaan käyttää tekstiiliteollisuudessa, kuten silkin liimanpoistossa.
Elintarviketeollisuus: Proteaasi K:tä voidaan käyttää elintarviketeollisuudessa lihan mureuttamiseen, alkoholin kirkastukseen jne.
Pesuaine: Entsyymilisätty pyykinpesuaine on uusi tuote pesuaineissa. Emäksistä proteaasia sisältävä pyykinpesuaine voi poistaa veri- ja proteiinilian vaatteista. Mutta kun käytät sitä, varo koskettamasta ihoa välttääksesi vaurioittamasta ihon pinnalla olevaa proteiinia ja aiheuttamasta allergisia reaktioita, kuten ihottumaa ja ekseemaa.

Rakenteelliset ominaisuudet

 

Proteinaasi K:n molekyylipaino on noin 28 900 daltonia (28,9 kDa), ja kirjallisuudessa on myös 29,3 kDa. Sen aminohapposekvenssi ja kolmiulotteinen tilarakenne ovat hyvin samankaltaisia ​​kuin seriiniproteaasiperheen subtilisiini, mutta siinä on myös joitain ainutlaatuisia piirteitä.

Disulfidisidosrakenne: Proteaasi K -molekyylit sisältävät disulfidisidoksia, jotka lisäävät niiden stabiilisuutta ja mahdollistavat niiden aktiivisuuden ylläpitämisen laajalla pH-alueella ja korkeissa lämpötiloissa.
Ca ² ⁺ -sitoutumiskohdat:Proteinaasi k -jauhesisältää kaksi Ca ² ⁺ -sitoutumiskohtaa, jotka, vaikka ovat kaukana aktiivisesta keskuksesta, ovat ratkaisevia entsyymin katalyyttisen aktiivisuuden ylläpitämisessä. Ca ² ⁺:n poistaminen aiheuttaa sen, että proteaasi K menettää noin 80 % aktiivisuudestaan, ja Ca 2 ⁺:n lisääminen uudelleen voi palauttaa sen aktiivisuuden vain osittain.
Katalyyttinen triadi: Proteaasi K:llä on katalyyttinen triadi Asp-His69-Ser224, joka on sen hydrolyyttisen aktiivisuuden avainrakenne.

Toimintamekanismi

 

Proteaasi K voi ensisijaisesti hydrolysoida esteri- ja peptidisidoksia hydrofobisten aminohappojen, rikki-pitoisten aminohappojen ja aromaattisten aminohappojen C--pään vieressä, hydrolysoimalla proteiineja lyhyiksi peptideiksi. Sen vaikutusmekanismi sisältää pääasiassa seuraavat vaiheet:

Entsyymisubstraatin sitoutuminen: Kun proteaasi K on sekoitettu substraatin kanssa, substraatti sitoutuu entsyymin aktiiviseen kohtaan muodostaen entsyymisubstraattikompleksin.
Katalyyttinen reaktio: Aktiivisen kohdan vaikutuksesta substraatin peptidisidos hydrolysoituu muodostaen entsyymistä erotetun tuotteen.
Proteaasi K:n voimakas hajoamisvaikutus tekee siitä avainreagenssin erilaisissa biokemiallisissa reaktioissa, erityisesti DNA- ja RNA-uuttoprosesseissa. Proteaasi K voi tehokkaasti hajottaa nukleiinihappoihin sitoutuneita proteiineja, vapauttaa nukleiinihappoja ja estää nukleaasien aktiivisuutta vähentäen nukleiinihappojen hajoamista uuton aikana.

Proteinaasi k -jauhe, erittäin aktiivisena ja substraattispesifisenä seriiniproteaasina, jolla on laaja valikoima sovelluksia biokemiassa, molekyylibiologiassa, lääketieteessä ja teollisuudessa. Se voi hajottaa proteiineja, jotka sitoutuvat nukleiinihappoihin ja vapauttavat nukleiinihappoja; Lisää koettimien mahdollisuuksia sitoutua kohdenukleiinihappoihin in situ -hybridisaatioteknologialla; Käytetään virusten inaktivointiin ja desinfiointiin; Poista proteiiniepäpuhtaudet Western blot - ja pulssielektroforeesikokeissa; Sillä on lääketieteellistä arvoa lääketieteen alalla; Käytetään teollisuuden aloilla, kuten nahanjalostuksessa, tekstiiliteollisuudessa, elintarviketeollisuudessa ja pesuaineiden valmistuksessa. Proteinaasi K:ta käytettäessä tulee kuitenkin kiinnittää huomiota sen säilytystapaan ja käyttöolosuhteisiin sen stabiilisuuden ja aktiivisuuden varmistamiseksi.

Proteinaasi K on laaja{0}}spektrinen seriiniproteaasi, jota käytetään laajalti molekyylibiologiassa, biokemiassa ja lääketieteellisessä tutkimuksessa sen ainutlaatuisten entsymaattisten ominaisuuksien ja stabiiliuden vuoksi. Pakastekuivattuna-jauheena Proteinase K Powderilla on ratkaiseva rooli kokeissa, kuten nukleiinihappouutossa, proteiinien pilkkomisessa ja kudosten homogenisoinnissa. Minkä tahansa biologisen reagenssin käyttöön liittyy kuitenkin mahdollisia riskejä, ja sen haittavaikutukset voivat koskea käyttäjien terveyttä ja koeympäristön turvallisuutta.

Suositut Tagit: proteinaasi k jauhe cas 39450-01-6, toimittajat, valmistajat, tehdas, tukkumyynti, osta, hinta, irtotavarana, myytävänä