Sephadex G75on eräänlainen geelisuodattimen täyteaine, jolla on hyvä suorituskyky. Se valmistetaan silloittamalla dekstraani ja epikloorohydriini. Se on helmenmuotoinen geeli, jossa on suuri määrä hydroksyyliryhmiä, joita on helppo turvota vesi- ja elektrolyyttiliuoksissa. Tämän yhdisteen suurin poissulkemisraja on 80000, ja spesifinen turvotusaste riippuu kuivien hartsien ja käyttöolosuhteiden määrästä. Esimerkiksi tietyissä olosuhteissa kuivahartsin turvotusaste voi olla 519 ml/g. Kun toiminnan pH -alue on 6,210 (5,210 joillekin tuotteille), yhdiste voi pysyä vakaana. On suositeltavaa säilyttää huoneenlämpötilassa, viileä ja pois valosta lämpötila -alueella 430 astetta (tai 425 astetta) sen suorituskyvyn ja vakauden säilyttämiseksi. Tämä aine on erityisen sopiva suurille biomolekyyleille, joiden molekyylipaino on yli 80000. Yhden - -vaihetoiminnan kautta on mahdollista nopeasti suolanpoistoa, poistaa epäpuhtaudet ja siirtää molekyylejä uuteen puskuriliuokseen. Suolanpoiston ja puskurin korvaamisen lisäksi Sephadex G-75 soveltuu myös suurten biomolekyylien puhdistusprosessiin.
 |
 |
Sephadex G75on dekstraanigeeli, jota käytetään pääasiassa biokemian ja molekyylibiologian erotus- ja puhdistustekniikkaan. Tämän aineen päätarkoitus on seuraava:
Suolanpoistoprosessissa se voi tehokkaasti poistaa suolat (yleensä pienet molekyyliset epäorgaaniset suolat) biologisista molekyyliliuoksista. Tämän aineen etuna on, että se on helppo käyttää, nopeaa ja voi saavuttaa tehokkaan suolanpoiston muuttamatta biomolekyylien aktiivisuutta. Lisäksi sen erinomaisen kemiallisen stabiilisuuden ja biologisen yhteensopivuuden vuoksi se soveltuu erilaisten biomolekyylien, mukaan lukien proteiinien, peptidien, nukleiinihappojen jne. Salalasaviivoihin, geeli -suolanpoistoon yhdistetään yleensä muihin puhdistustekniikoihin, kuten ioninvaihtoon, affiniteettikromatografiaan jne., Jotta saavutetaan kattavan puhdistamisen ja erottamisen erottaminen.
Tällä aineella on laaja valikoima sovelluksia puskurin korvaamisessa, etenkin biokemian ja molekyylibiologian aloilla. Esimerkiksi proteiinien puhdistusprosessissa on joskus välttämätöntä siirtää proteiineja puskurijärjestelmästä toiseen puskurijärjestelmään, joka sopii paremmin niiden stabiilisuuteen ja aktiivisuuteen. Ja tämä aine voi tehokkaasti saavuttaa tämän tavoitteen; Nukleiinihappopoistoprosessissa on myös välttämätöntä erottaa nukleiinihappo epäpuhtauksia ja suoloja sisältävästä liuoksesta ja siirtää se uuteen puskuriin seuraavia operaatioita varten. Se voidaan soveltaa myös tähän skenaarioon; Soluviljelmän aikana on joskus välttämätöntä korvata viljelyalusta tai puskuri solujen kasvun ja aktiivisuuden ylläpitämiseksi. Sitä voidaan käyttää haitallisten aineiden poistamiseen vanhoista kulttuurivälineistä tai puskureista ja uusien kulttuurivälineiden tai puskurien esittämiseen.
Molekyyli
Proteiinitutkimus- ja valmistusprosesseissa on yleensä tarpeen erottaa kohdeproteiinit monimutkaisista seoksista. Se voi erottaa proteiinit niiden koon perusteella ja saavuttaa siten proteiinien puhdistuksen. Säätämällä eluutioolosuhteita, kuten eluentin ionin lujuus ja pH -arvo, proteiinien erotustehokkuus voidaan edelleen optimoida. Proteiinien ja nukleiinihappojen lisäksi sitä voidaan käyttää myös muiden biomolekyylien, kuten polysakkaridien, entsyymien, vasta -aineiden jne. Erottamiseen ja puhdistamiseen. Näiden biomalekyylien liikkumisnopeus geelissä riippuu niiden koosta ja muodosta, jotta voidaan saavuttaa tehokas erotus. Vaikka tätä ainetta ei käytetä suoraan työkaluna molekyylipainon määrittämiseen, se voi toimia apuvälineinä molekyylipainon määrittämisessä.
Proteiinien puhdistusprosessissa on yleensä välttämätöntä poistaa pienet molekyyliset epäpuhtaudet, kuten suolat, pienimolekyyliset metaboliitit, sitoutumattomat ligandit jne. Proteiiniliuoksesta. Tämä aine voi tehokkaasti poistaa nämä pienimolekyyliset epäpuhtaudet proteiiniliuoksista, mikä parantaa proteiinien puhtautta. Sen molekyyliseulavaikutus mahdollistaa näiden pienten molekyylien epäpuhtauksien poistamisen tehokkaasti, mikä johtaa puhtaampiin nukleiinihappoihin. Entsyymivalmisteet sisältävät tyypillisesti pienimolekyylisiä epäpuhtauksia, kuten reagoimattomia substraateja, estäjiä, metaboliitteja jne. Nämä epäpuhtaudet voivat vaikuttaa entsyymien aktiivisuuteen ja stabiilisuuteen. Materiaalin geelisuodatuksen avulla nämä pienet molekyyliset epäpuhtaudet voidaan poistaa tehokkaasti ja entsyymien valmistuksen puhtautta voidaan parantaa. Proteiinien ja nukleiinihappojen lisäksi
Simuloida solujen välinen signaalinsiirto
Solujen välinen signaalinsiirto on elämänsäädännön ydintoiminnan ydinsäätelymekanismi, johon sisältyy monimutkaiset prosessit, kuten solujen tunnistaminen, signaalin muuntaminen ja fysiologinen vaste. Perinteinen tutkimus riippuu usein elävistä solumalleista, mutta on olemassa rajoituksia, kuten monimutkaisia signaaliverkkoja ja useita häiritseviä tekijöitä.Sephadex G75on klassinen dekstraanigeelisuodatusväliaine. Sen huokoinen rakenne ja molekyyliseulavaikutus tarjoavat ainutlaatuisen fysikaalisen mallin solujen välisen signaalin transduktion simuloimiseksi.
Fysikaalinen malli solujen välisen signaalinsiirron simuloimiseksi käyttämällä Sephadex G-75: tä
Solujen välisten aukkojen simulointi
Gap -liitos on hydrofiilinen kanava, joka muodostuu vierekkäisten solujen väliin linkkerin kautta, mikä mahdollistaa pienten molekyylien vapaan vaihdon molekyylipainolla<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Signaalimolekyylien gradientin muodostuminen: signaalimolekyylien eri pitoisuudet (kuten cAMP, CA ²+) ladataan geelipylvääseen. Pienten molekyylien diffuusio -nopeuden ero geelhuokosessa voidaan havaita molekyylin seula -vaikutuksen avulla, ja kemiallisten signaalien gradienttien siirtyminen solujen välillä voidaan simuloida.
Synergistinen vasteen simulointi: Kaksi vuorovaikutusta molekyyliä (kuten ligandi ja reseptori) ladataan vastaavasti geelipylvään molemmille päille, ja niiden sitoutumiskinetiikkaa analysoidaan eluointiaikaeron aikana simuloidakseen molekyylintunnistusprosessia solujen välisessä suorassa kosketusviestinnässä.
Molekyylikontaktin simulointi kalvon pinnalla
Kommunbraanin pintamolekyylien välinen viestintä riippuu solukalvon pintaproteiinien spesifisistä vuorovaikutuksista. Sephadex G-75 voi simuloida tätä prosessia funktionaalisen modifioinnin avulla:
Reseptoriligandin sitoutumiskoe: Biotinyloidut reseptoriproteiinit (kuten EGFR) on kiinnitetty geelihiukkasten pintaan, fluoresoivat leimattuja ligandeja (kuten EGF) otetaan streptavidiinin biotiinijärjestelmän kautta, ja sitoutumisen signaalin voimakkuutta tarkkaillaan fluoresenssipisteen kvantifioimiseksi reseptorin ligandin affalaisuudella.
Kilpailukykyinen sitoutumisanalyysi: Reseptoriligandikompleksin esikuormitus geelipylväässä, lisää kilpailukykyiset estäjät, joilla on erilaisia pitoisuuksia (kuten anti -EGFR -vasta -aineita), laskevat estovakio (KI) eluution piikin muutoksen läpi ja simuloi lääkkeiden interventiovaikutus solusignaalireiteillä.
Kemiallisen signaalinsiirron simulointi
Kemiallinen signaalinsiirto riippuu kemiallisten signalointimolekyylien (kuten hormonien ja sytokiinien) diffuusiosta, jotka solujen erittävät kehon nesteiden tai solunulkoisen matriisin kautta kohdesoluihin. Sephadex G - 75 voi rakentaa kolmiulotteisen diffuusiomallin:
Parakriinijärjestelmän simulointi: Erityssolut (kuten makrofagit) ja kohdesolut (kuten T -solut) kapseloidaan vastaavasti geelimikrofereihin, ja kohdesolujen aktivointitila (kuten CD69 -ekspressio) havaitaan CO -viljelyn avulla simuloimaan parakriinisignaalien paikallista vaikutusta.
Endokriinisen signaalin siirto: fluoresoivat merkityt hormonit (kuten insuliini) ladataan geelipylvääseen, ja niiden vuorovaikutus geelihuokosten kanssa analysoidaan eluutioajan aikana, ja hormonien puoli - -elämää verenkierto- ja kohde -elinten jakautumista ennustetaan yhdistämällä matemaattiset mallit.
Sephadex G-75: n sovellustapaus solun signalointitutkimuksessa
Punasolujen signaalinsignaalin siirron ja integriinin toiminnan tutkimus
Verihiutaleiden tarttuvuusreseptori -integriini IIB 3 on verihiutalemembraanin pinnalla runsain glykoproteiini ja on ratkaisevan tärkeä hemostaasin ja trombin muodostumiselle. Tutki Sephadex G-75: n käyttöä verihiutaleiden ja subendoteliaalisen kollageenin vuorovaikutuksen simuloimiseksi:
Integriinin aktivointimalli: Puhdistettu integriini IIB 3 kiinnitettiin geelihiukkasten pintaan ja liukoinen fibrinogeeni (FG) lisättiin ligandina. Sitoutumiskinetiikka havaittiin pintaplasmoniresonanssilla (SPR). Todettiin, että integriinin affiniteetti FG: hen aktivoinnin jälkeen parantui merkittävästi (KD väheni μm: stä NM: ään).
Värerylituslääkkeen anto -lääkkeen seulonta: Esikuorma -integriini FG -kompleksi geelipylväässä, lisää verihiutaleiden vastaiset lääkkeet, joilla on erilaisia pitoisuuksia (kuten Tirofiban), lasketaan integriiniaktiivisuuden lääkkeiden estoasteen eluution huipun siirtymällä ja tarjoavat korkean - läpikulun seulontaalustan uusien antifrombottisten lääkkeiden kehittämiselle.
Kasvaimeen liittyvien signalointireittien säätely
Kasvainsolut edistävät lisääntymistä ja etäpesäkkeitä epänormaalilla aktivoinnilla, kuten MAPK ja PI3K/AKT. Sephadex G-75: tä voidaan käyttää avainproteiinien eristämiseen ja puhdistamiseen signalointireiteissä:
EGFR-signaalireitin tutkimus: EGFR-proteiini puhdistettiin Sephadex G-75 -geelisuodatuksella ja sen fosforylaatiotila analysoitiin massaspektrometrialla. Todettiin, että EGFR: n Y1068- ja Y1086 -kohtien fosforylaatiotaso nousi merkittävästi EGF -stimulaation jälkeen, jotka aktivoivat alavirran ERK1/2- ja AKT -signaalit.
Lääkeresistenssi mekanismianalyysi: Lääkkeessä - resistenttejä mahalaukun syöpäsoluja (SGC7901/VCR) UHRF1-proteiini eristettiin ja puhdistettiin Sephadex G-75: llä, ja havaittiin, että sen yliekspressio voi estää apoptoosin aihioiden (kuten kaspaasi-3 -ajojen) aktivointia (kuten kaspaasi-3).
Immuunisolujen signalointi ja polysakkaridien säätely
Punaisen levän polysakkaridit (BFP) parantavat immuunivastetta aktivoimalla NF - κ B ja MAPK -signalointireitit makrofageissa. Tutkimus BFP: n ja sen komponenttien (F1, F2, F3) erottamisesta ja puhdistamisesta käyttämällä Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% saatiin Sephadex G-75 -geelisuodatuksella yhdistettynä DEAE-selluloosan 52-ioninvaihtokromatografiaan ja niiden molekyylipainot olivat vastaavasti 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa ja 45 kDa.
Signaalireitin aktivointi: RAW264.7 -makrofagimallissa BFP ja sen komponentit voivat merkittävästi indusoida NO: n ja TNF: n - erityksen, ja sen mekanismiin sisältyy NF - κ B Ydinnonnan translokaatio ja JNK: n, ERK: n ja P38 MAPK: n fosforylaatio. Sephadex G - 75: llä erotetut puhdistetut komponentit osoittivat, että F1: llä oli voimakkain aktivointivaikutus NF - κ B- ja MAPK -reiteille (lisää tuotantoa 2,5 kertaa ja TNF - eritys 3 kertaa).
Suositut Tagit: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, toimittajat, valmistajat, tehdas, tukkumyynti, osta, hinta, irtotavara, myytävänä